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產(chǎn)品展示
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2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量

  • 型   號:71311
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-23
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

2x SYBR qPCR Mix是SYBR I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預混液,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,可減少操作步驟,縮短加樣時間,降低污染幾率。其核心組分是全新的抗體法HotmasterTaq DNA聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer體系,有效抑制非特異性擴增
2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量

2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)


2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量 

目錄號:71311

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

71311-500

500 rxns (20 μl/rxn)

71311-2500

2500 rxns (20 μl/rxn)

2x SYBR qPCR Mix

1 ml x5

1 ml x25

50x ROX Dye 1(高濃度)

200 μl

200 μl x5

50x ROX Dye 2(低濃度)

200 μl

200 μl x5

保存條件

-20℃保存,有效期 24 個月, 使用前充分融解,輕柔顛倒混勻。短期使用可放在 4 ℃,避免反復凍融。

產(chǎn)品簡介

2x SYBR qPCR Mix是SYBR I嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預混液,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,可減少操作步驟,縮短加樣時間,降低污染幾率。其核心組分是全新的抗體法HotmasterTaq DNA聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer體系,有效抑制非特異性擴增,可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量,獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果,具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。

本產(chǎn)品含有獨立包裝參比染料50x ROX,用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差, 不同儀器所需ROX Reference Dye濃度不同

操作步驟:(以ABI Step One Plus機型為測試機型)

1. 將DNA模板、引物、2 x SYBR qPCR Mix、ddH2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應體系:(以20μl反應體系為例)

Components

Volume (20μl)

Final Concentration

2x SYBR qPCR Mix

10 μl

Forward Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

50x ROX Reference Dye 1

0.4 μl

1 x

DNA Template

Variable

As required

ddH2O

Up to 20 μl

Not applicable

注意:

1) 推薦模板加樣量為1-2 μl / 20μl反應體系,cDNA原液≤總反應體系的10%,基因組DNA的量為10 - 100 ng。

因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同,可對模板進行梯度稀釋,以確定最佳的模板使用量。

2) 通常推薦引物濃度為0.2 μM,就可以得到較好的結(jié)果,反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進行調(diào)整。擴增效率不高的情況下,可提高引物濃度;發(fā)生非特異性反應時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應體系。

3) 舉例為常規(guī)PCR反應體系和反應程序,實際操作中應根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進行相應的改進和優(yōu)化。


3. qPCR反應程序

注意:

1) 本產(chǎn)品兼容性強,絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應程序。一般來說,二步法擴增特異性高,三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差,可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度;如果因使用Tm值較低的引物等原因,得不到良好的實驗結(jié)果時,可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增。

2) 根據(jù)引物的Tm值進行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定;

3) 延伸(退火&延伸)時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。

 2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量 


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