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高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨

  • 型   號:91615
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-23
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

CRISPR/Cas9介導的基因編輯技術(shù)是現(xiàn)在生物學、醫(yī)學和育種研究等領(lǐng)域的常用手段。該技術(shù)體系僅需要Cas9蛋白和sgRNA即可實現(xiàn)高效的基因編輯,其中Cas9蛋白是通用組分(無需修改),sgRNA則需要根據(jù)不同靶位點來設(shè)計和轉(zhuǎn)錄。
高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨

FlashPure sgRNASynthesis Kit

高效 sgRNA 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒


高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨

目錄號:91615

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

91615-25

25 rxns (20 μl/rxn)

91615-50

50 rxns (20 μl/rxn)

2×PCR Mix

250 μl

500 μl

Primer Mix

50 μl

100 μl

NTPs

200 μl

400 μl

10×Reaction Buffer

50 μl

100 μl

T7 Enzyme Mix

50 μl

100 μl

DNase I

25 μl

50 μl

Buffer MRC

5 ml

10 ml

Wash Solution 1

6 ml

12 m

Wash Solution 2/3

5 ml

10 ml

RNase-Free H2O

5 ml

10 ml

sgRNASpinColumnWithCollectionTubes

25 套

50 套

保存條件: -20℃保存,有效期 12 個月。

產(chǎn)品簡介

CRISPR/Cas9介導的基因編輯技術(shù)是現(xiàn)在生物學、醫(yī)學和育種研究等領(lǐng)域的常用手段。該技術(shù)體系僅需要Cas9蛋白和sgRNA即可實現(xiàn)高效的基因編輯,其中Cas9蛋白是通用組分(無需修改),sgRNA則需要根據(jù)不同靶位點來設(shè)計和轉(zhuǎn)錄。

高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒采用T7 RNA聚合酶復合物高效轉(zhuǎn)錄spCas9sgRNA。試劑盒中的反應(yīng)體系根據(jù)sgRNA特點進行優(yōu)化,每個反應(yīng)可在4小時內(nèi)(實際操作為半天或1天之內(nèi))獲得多達100~200μg的sgRNA。sgRNA可直接用Cas9蛋白體外切割,純化后可用于細胞注射等實驗。

試劑盒中配備了合成sgRNA轉(zhuǎn)錄模板,sgRNA轉(zhuǎn)錄所需的全部試劑,用戶僅需要合成含有1條CRISPR靶點的引物就能完成sgRNA體外轉(zhuǎn)錄。

操作步驟:

1. 設(shè)計PCR正向引物,替換標紅的N(20)即可:

Primer Target5’TAATACGACTCACTATAGGN(20)GTTTTAGAGCTAGAAATA -3’

注:spCas9識別的靶點為20nt,共20個堿基序列,N(20)為靶位點不包含PAM的20個堿基序列,建議避免選擇有3個(或3個以上)連續(xù)T堿基的位點。

2. 找公司合成Primer Target,稀釋到 1mM 濃度備用。

3. 配制PCR反應(yīng)體系:

Components

Volume (20μl)

2×PCR Mix

10 μl

Primer Mix

2 μl

Primer Target(1mM)

0.4 μl

ddH2O

7.6 μl



4. 制備體外轉(zhuǎn)錄模板,設(shè)置反應(yīng)程序如下:

5. 按下表配制sgRNA轉(zhuǎn)錄體系,37℃反應(yīng)4 hours。(操作過程中采用無RNA酶耗材)

Components

Volume (20μl)

NTPs

8 μl

PCR product(as template)

8 μl

10×Reaction Buffer

2 μl

T7 Enzyme Mix

2 μl

6. (可選步驟) 在反應(yīng)體系中加入1 μL的DNase I ,37℃孵育 15 min,消化轉(zhuǎn)錄的DNA模板。

7. 過柱純化:

提示:第一次使用前請先在 Wash Solution 1 瓶和 Wash Solution 2/3 瓶中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標簽,并做好標記。sgRNA 容易降解,全程使用無酶耗材,請小心操作、避免降解。

(1)于冰上,用 RNase-Free H2O 將 RNA 樣品補足至 100 μL, 加入 200 μL Buffer MRC,輕柔混勻。

(2)加入 375 μL(1.25 倍體積)無水乙醇并混勻。

(3)將上一步所得溶液加入一套吸附柱中,13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液,將吸附柱重新套回收集管。

(4)加入 700 μl Wash Solution 1(請先檢查是否已加入無水乙 醇),13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液。

(5)漂洗:加入 500 μl Wash Solution 2/3,13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液。

(6)二次漂洗:重復步驟(5)一次。

(7)干燥:將離心吸附柱于 13,000 rpm 離心 2 min,甩干殘留的漂洗液。

(8)洗脫:將吸附柱放入一個新的 1.5 ml 離心管中,在吸附膜的中央懸空滴加 10 ~ 40 μl RNase-Free H2O,室溫放置 2 min,13,000 rpm 離心 1 min,收集 sgRNA,用于后續(xù)實驗。

高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒-現(xiàn)貨


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